Fluoreska filtrilo estas esenca komponento en fluoreskeca mikroskopo. Tipa sistemo havas tri bazajn filtrilojn: ekscita filtrilo, emisiofiltrilo kaj dikroika spegulo. Ili estas ofte enpakitaj en kubo tiel ke la grupo estas enigita kune en la mikroskopon.
Kiel funkcias fluoreskeca filtrilo?
Ekscita Filtrilo
Ekscitadfiltriloj elsendas lumon de specifa ondolongo kaj blokas aliajn ondolongojn. Ili povas esti uzitaj por produkti malsamajn kolorojn agordante la filtrilon por permesi nur unu koloron tra. La ekscitaj filtriloj venas en du ĉefaj tipoj - longpasaj filtriloj kaj gruppasaj filtriloj. La ekscitilo estas kutime bendpasfiltrilo kiu pasas nur la ondolongojn absorbitajn per la fluoroforo, tiel minimumigante eksciton de aliaj fontoj de fluoreskeco kaj blokante ekscitlumon en la fluoreskeca emisiogrupo. Kiel montras la blua linio en la figuro, BP estas 460-495, kio signifas, ke ĝi povas nur trapasi la fluoreskecon de 460-495nm.
Ĝi estas metita ene de la lumpado de fluoreskecmikroskopo kaj filtras ĉiujn ondolongojn de la lumfonto krom la fluorofora ekscitintervalo. La filtrila minimuma transdono diktas la brilecon kaj brilecon de bildoj. Minimumo de 40% dissendo por iu ekscitfiltrilo estas rekomendita tia ke la dissendo estas ideale >85%. La bendolarĝo de la ekscitfiltrilo devus esti tute ene de la fluorofora ekscitintervalo tia ke la centra ondolongo (CWL) de la filtrilo estas kiel eble plej proksima al la pinta ekscitlongo de la fluoroforo. La ekscitfiltrila optika denseco (OD) diktas la fonbildomallumon; OD estas mezuro de kiom bone filtrilo blokas la ondolongojn ekstere de dissenda intervalo aŭ bendolarĝo. Minimuma OD de 3.0 estas rekomendita sed OD de 6.0 aŭ pli granda estas ideala.
Emisio Filtrilo
Emisiofiltriloj servas la celon de permesado de al la dezirinda fluoreskeco de la provaĵo atingi la detektilon. Ili blokas pli mallongajn ondolongojn kaj havas altan dissendon por pli longaj ondolongoj. La filtrila tipo ankaŭ estas rilata al nombro, ekz. BA510IF en la figuro (interferenca bariera filtrilo), tiu nomo rilatas al la ondolongo je 50% de ĝia maksimuma dissendo.
La samaj rekomendoj por ekscitfiltriloj validas por emisiofiltriloj: minimuma dissendo, bendolarĝo, OD kaj CWL. Emisiofiltrilo kun la ideala CWL, minimuma dissendo kaj OD-kombinaĵo disponigas la plej brilajn eblajn bildojn, kun la plej profunda ebla blokado, kaj certigas la detekton de la plej malfortaj elsendaj signaloj.
Dikroika Spegulo
La dikroika spegulo estas metita inter la ekscitfiltrilo kaj emisiofiltrilo laŭ 45° angulo kaj reflektas la ekscitsignalon direkte al la fluoroforo elsendante la emisiosignalon direkte al la detektilo. Idealaj dikroikaj filtriloj kaj radiosendiloj havas akrajn transirojn inter maksimuma reflektado kaj maksimuma dissendo, kun>95% reflektado por la bendolarĝo de la ekscitfiltrilo kaj dissendo de>90% por la bendolarĝo de la emisiofiltrilo. Elektu la filtrilon kun la intersekca ondolongo (λ) de la fluoroforo en menso, por minimumigi vagan lumon kaj maksimumigi la fluoreskan bildon-bruo-proporcion.
La dikroika spegulo en tiu ĉi figuro estas la DM505, tiel nomita ĉar 505 nanometroj estas la ondolongo ĉe 50% de la maksimuma dissendo por tiu spegulo. La dissendkurbo por tiu spegulo montras altan dissendon super 505 nm, krutan falon en dissendo maldekstren de 505 nanometroj, kaj maksimuman reflektivecon maldekstren de 505 nanometroj sed daŭre povas havi iun dissendon sub 505 nm.
Kio estas la diferenco inter longa enirpermesilo kaj bandpasaj filtriloj?
Fluoreskaj filtriloj povas esti dividitaj en du tipojn: longa enirpermesilo (LP) kaj gruppasejo (BP).
Longpasaj filtriloj elsendas longajn ondolongojn kaj blokas la pli mallongajn. La tranĉita ondolongo estas la valoro ĉe 50% de pintdissendo, kaj ĉiuj ondolongoj super la tranĉo estas elsenditaj per la longpasaj filtriloj. Ili estas ofte uzitaj en dikroaj speguloj kaj emisiofiltriloj. Longpasaj filtriloj devus esti uzitaj kiam la aplikiĝo postulas maksimuman emisiokolekton kaj kiam spektra diskriminacio ne estas dezirinda aŭ necesa, kio estas ĝenerale la kazo por enketoj kiuj generas ununuran elsendan specion en specimenoj kun relative malaltaj niveloj de fona aŭtofluoreskeco.
Bandpasaj filtriloj nur elsendas certan ondolongan bandon, kaj blokas aliajn. Ili reduktas interkruciĝon permesante nur la plej fortan parton de la fluorofora emisiospektro esti elsendita, reduktas aŭtofluoreskecan bruon kaj tiel plibonigas la signal-al-bruo-proporcion en altaj fonaj aŭtofluoreskecaj specimenoj, kiujn longaj enirpermesilfiltriloj ne povas oferti.
Kiom da specoj de fluoreskecaj filtriloj BestScope povas provizi?
Iuj oftaj specoj de filtriloj inkluzivas bluajn, verdajn kaj ultraviolajn filtrilojn. Kiel montrite en la tabelo.
| Filtrilo Aro | Ekscita Filtrilo | Dikroika Spegulo | Bariera Filtrilo | LED-lampo Onda Longo | Apliko |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485 nm | ·FITC: Fluoreska antikorpa metodo ·Acida oranĝo: DNA, RNA ·Auramino: tuberkula bacilo ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535 nm | ·Rodamino, TRITC: Fluoreska antikorpa metodo ·Propidiojoduro: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365 nm | · Aŭto-fluoreskeca observado ·DAPI: DNA-makulado ·Hoechest 332528, 33342: uzita por Kromosommakulado |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405 nm | · Katekolaminoj ·5-hidroksi-triptamino ·Tetraciclino: Skeleto, Dentoj |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 nm | ·Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Filtrilaj aroj kiuj estas uzitaj en fluoreskecaj akiroj estas dizajnitaj ĉirkaŭ la plej gravaj ondolongoj uzitaj en fluoreskaplikoj, kiu estas bazita ĉirkaŭ la plej uzitaj fluoroforoj. Tial, ili ankaŭ estas nomitaj laŭ la fluoroforo kiun ili estas celitaj por bildigo, kiel ekzemple DAPI (bluaj), FITC (verdaj) aŭ TRITC (ruĝaj) filtrilaj kuboj.
| Filtrilo Aro | Ekscita Filtrilo | Dikroika Spegulo | Bariera Filtrilo | LED-lampo Onda Longo |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485 nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365 nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535 nm |
| FL-Auramino | BP470 | DM480 | BA485 | 450 nm |
| Teksasa Ruĝa | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Kiel vi elektas fluoreskecan filtrilon?
1. La principo de elektado de fluoreskeca filtrilo estas lasi la fluoreskecan/emision lumon trapasi la bildigan finon laŭeble, kaj tute bloki la ekscitan lumon samtempe, por akiri la plej altan signal-al-bruo-proporcion. Precipe por la aplikado de multfotona ekscito kaj totala interna reflekta mikroskopo, la malforta bruo ankaŭ kaŭzos grandan interferon al la bildiga efiko, do la postulo pri signalo al bruo-proporcio estas pli alta.
2. Sciu la eksciton kaj emisiospektron de la fluoroforo. Por konstrui fluoreskecan filtrilon kiu generas altkvalitan, alt-kontrastan bildon kun nigra fono, ekscito- kaj emisiofiltriloj devus atingi altan dissendon kun minimuma enirbendo ondeto super la regionoj kiuj egalrilatas al la fluoroforaj ekscitpintoj aŭ emisioj.
3. Konsideru la fortikecon de fluoreskecaj filtriloj. Ĉi tiuj filtriloj devas esti nepenetreblaj al intensaj lumfontoj, kiuj generas ultraviolan (UV) lumon, kiu povus kaŭzi "elĉerpiĝon", precipe de la ekscitila filtrilo ĉar ĝi estas submetita al la plena intenseco de la lumfonto.
La Malsamaj Fluoreskaj Specimenaj Bildoj
La rimedoj estas kolektitaj kaj organizitaj en la Interreto, kaj estas uzataj nur por lernado kaj komunikado. Se estas ia malobservo, bonvolu kontakti nin por forigi.
Afiŝtempo: Dec-09-2022